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医学免疫学实验课件目录•实验一抗原抗体反应•实验二免疫细胞的分离与培养•实验三免疫血清的制备与鉴定•实验四细胞因子的检测•实验五免疫细胞的激活与分化01实验一抗原抗体反应Chapter抗原抗体的基本概念抗原抗体指能够刺激机体免疫系统产生抗体或致敏淋巴细胞,指由抗原刺激机体免疫系统产生的一种蛋白质,能并能与相应抗体或致敏淋巴细胞结合,发生免疫反与相应抗原发生特异性结合,发挥免疫效应应的物质抗原抗体的特异性结合抗原抗体的结合具有高度的特异性,即一种抗原只能与一种抗体发生特异性结合01抗原抗体的特异性结合是医学免疫学实验的基础,可用于疾病的诊断、预防和治疗02抗原抗体的反应类型沉淀反应指抗原抗体结合后,在一定条件下可形成肉眼可1见的沉淀物的反应如直接凝集反应和间接凝集反应凝集反应指颗粒性抗原与相应抗体结合后,在一定条件下2可形成肉眼可见的凝集物的反应如直接凝集反应和间接凝集反应补体结合反应指补体与抗原抗体复合物结合后,可引起一系列3生物学效应的反应如溶细胞作用、调理吞噬作用等02实验二免疫细胞的分离与培养Chapter免疫细胞的分离方法利用不同细胞密度的特点,通过密度梯度离心法离心将细胞分离,常用方法有Percoll密度梯度离心法和Ficoll密度梯度离心法将细胞悬液种植在特定培养皿上,贴壁筛选法只有贴壁生长的细胞能够继续繁殖,常用的有T细胞分离培养法和B细胞分离培养法利用磁珠与抗体结合,将特定细磁珠分离法胞从混合细胞中分离出来,如CD4+T细胞分离和CD8+T细胞利用荧光标记抗体和细胞表面抗分离流式细胞术原的特异性结合,通过荧光检测系统对细胞进行快速分选和计数免疫细胞的体外培养培养基生长因子提供细胞生长所需的营养物质,刺激细胞生长和分裂的蛋白质,如氨基酸、维生素、糖、脂肪酸如白细胞介素、集落刺激因子等01等0203培养条件传代培养适宜的温度、湿度、气体环境等,当细胞密度达到一定水平时,需以保证细胞的正常生长和代谢要进行传代培养,即将细胞分散04并重新种植在新的培养器皿中免疫细胞的功能检测增殖能力检测细胞因子检测通过检测细胞分裂的速率来评估细胞的增殖能力,常用方利用酶联免疫吸附试验或流式细胞术检测细胞分泌的细胞法有MTT法和BrdU法因子,如IL-
2、IL-
4、IFN-γ等细胞毒活性检测抗原提呈功能检测通过检测细胞对靶细胞的杀伤作用来评估细胞的细胞毒活通过检测抗原在细胞表面的表达情况来评估细胞的抗原提性,常用方法有CTL杀伤试验和NK细胞杀伤试验呈功能,常用方法有ELISA法和Flow cytometry法03实验三免疫血清的制备与鉴定Chapter免疫血清的制备过程01免疫血清的制备过程主要包括抗原的制备、免疫动物的接种、血清的收集和分离等步骤02抗原的制备是关键步骤之一,通常采用物理或化学方法将抗原物质溶解、破碎或纯化,以获得具有免疫原性的物质03免疫动物的接种可以采用皮下、肌肉或腹腔注射等多种方式,接种后需要定期观察动物的反应和免疫反应情况04血清的收集和分离是在免疫反应达到高峰后进行的,通常采用离心、沉淀等方法将免疫血清与其它成分分离,得到纯净的免疫血清免疫血清的效价测定效价测定是评估免疫血清免疫效果的重要手段,通常采用抗原-抗体01反应的方法进行测定效价测定的方法包括间接凝集试验、间接酶联免疫吸附试验、中和试02验等多种,根据抗原和抗体特性选择合适的方法效价测定需要设置阴性对照和阳性对照,以评估试验的准确性和可靠03性效价测定结果可以用来评估免疫血清的质量和免疫效果,为后续的实04验和应用提供参考免疫血清的质量控制质量控制是保证免疫血清质量和可靠性的重要措施,输入抗原的纯度直接影响免疫血清的质量和免疫效果,需02包括抗原的纯度、抗体的特异性、免疫血清的浓度和标题要采用高效液相色谱、凝胶电泳等方法进行纯度分析稳定性等方面的控制0103免疫血清的浓度和稳定性也是质量控制的重要方面,抗体的特异性是评估免疫血清识别能力和特异性的关04需要采用生物学方法、光谱分析等方法进行测定和评键指标,可以采用交叉反应试验等方法进行测定估04实验四细胞因子的检测Chapter细胞因子的基本概念010203细胞因子细胞因子种类细胞因子作用由免疫细胞和非免疫细胞分泌的、包括白细胞介素(IL)、干扰素通过与靶细胞表面的受体结合,调节免疫应答的小分子蛋白或多(IFN)、肿瘤坏死因子发挥调节免疫应答、促进细胞生肽(TNF)、集落刺激因子(CSF)长和分化等生物学功能等细胞因子的生物学活性免疫调节炎症反应组织损伤和修复细胞因子通过调节免疫细胞的活细胞因子在炎症反应中发挥重要某些细胞因子在组织损伤时发挥化和分化,参与免疫应答的诱导作用,可诱导炎症细胞的聚集和促修复作用,促进受损组织的再和调节活化,促进炎症介质的释放生和修复细胞因子的检测方法酶联免疫吸附试验(ELISA)01利用特异性抗体捕获细胞因子,通过酶标二抗检测细胞因子的浓度流式细胞术02利用荧光标记的特异性抗体检测细胞表面或胞内细胞因子的表达基因表达分析03利用基因芯片或RT-PCR技术检测细胞因子mRNA的表达水平05实验五免疫细胞的激活与分化Chapter免疫细胞的激活信号抗原刺激共刺激信号抗原提呈细胞(APC)表面的共刺激抗原与T细胞或B细胞表面的受体结合,分子与T细胞表面的受体结合,提供引发一系列信号转导,激活免疫细胞必要的共刺激信号,促使T细胞活化细胞因子作用如白介素(IL)、干扰素(IFN)、肿瘤坏死因子(TNF)等细胞因子,可与免疫细胞表面的受体结合,促进细胞活化免疫细胞的分化过程初始T细胞分化在抗原刺激和细胞因子的作用下,初始T细胞分化为不同亚型的效应T细胞,如Th
1、Th
2、Th17等B细胞分化B细胞在抗原刺激和Th细胞的辅助下,分化为浆细胞或记忆B细胞树突状细胞分化骨髓来源的造血干细胞分化为树突状细胞免疫细胞分化后的功能特点Th17细胞分泌IL-
17、IL-22等细胞因子,Th2细胞参与抗胞外病原体的防御和炎症浆细胞反应分泌IL-
4、IL-
5、IL-13等细胞因分泌特异性抗体,参与体液免疫子,参与体液免疫应答,促进B细应答胞增殖和抗体生成Th1细胞记忆T细胞和记忆B细胞分泌IL-
2、IFN-γ等细胞因子,介在二次感染时,可迅速增殖分化导细胞免疫应答,参与抗胞内病为效应T细胞或浆细胞,参与免疫原体的防御应答THANKS感谢观看。