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《动物细胞组织培养》ppt课件•动物细胞组织培养概述contents•动物细胞组织培养的基本原理•动物细胞组织培养技术目录•动物细胞组织培养的实验操作•动物细胞组织培养的挑战与前景01动物细胞组织培养概述定义与特点定义动物细胞组织培养是指将动物细胞从其原始组织中分离出来,并在人工条件下进行培养、繁殖和维持其生命活动的过程特点具有高度的体外模拟性、可操作性和可控制性,能够用于研究细胞生长、发育、分化、凋亡等生物学过程,以及用于药物筛选、疾病模型构建和组织工程等领域动物细胞组织培养的应用药物筛选组织工程通过体外培养动物细胞,模拟体内环通过动物细胞组织培养技术,可以体境,筛选具有药效的化合物或中药成外构建组织和器官,为组织缺损修复分,缩短药物研发周期,降低研发成和器官移植提供新的解决方案本疾病模型构建利用动物细胞组织培养技术构建疾病模型,有助于深入了解疾病发病机制、药物作用机制和药效评价等动物细胞组织培养的历史与发展历史回顾动物细胞组织培养技术自20世纪初诞生以来,经历了从简单分离培养到复杂体外模拟的发展历程早期的培养技术主要采用静态培养方式,而现代技术则更多地采用动态培养和微载体培养等方式发展趋势随着生物技术的不断发展,动物细胞组织培养技术正朝着更加精细、可控和模拟体内环境的方向发展同时,随着基因编辑技术的发展,通过基因修饰提高细胞培养效率和功能已成为新的研究热点02动物细胞组织培养的基本原理细胞全能性与细胞分化细胞全能性指细胞在特定条件下具有发育成完整个体的潜能细胞分化指同一来源的细胞逐渐产生出形态、结构、功能特征各不相同的细胞类群的过程细胞培养的环境因素010203温度湿度气体环境维持细胞正常代谢活动的影响细胞膜的通透性和细包括氧气和二氧化碳的浓必要条件胞代谢产物的浓度度,影响细胞的生长和代谢细胞培养基的成分与制备成分氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐、微量元素等制备根据不同细胞类型和培养目的,选择合适的培养基配方,并进行无菌处理动物细胞原代与传代培养原代培养从动物组织中获取的初始培养的细胞传代培养将原代培养的细胞继续在相同或不同的培养条件下进行培养03动物细胞组织培养技术细胞分离技术酶消化法机械法免疫法利用酶如胶原酶、胰蛋白通过显微操作仪等机械手利用抗体与细胞表面抗原酶等分解细胞间质,使细段,直接将细胞从组织中结合,通过磁珠分离或流胞分离成单个或小群体分离出来式细胞术分离特定细胞细胞鉴定技术免疫学鉴定利用特异性抗体标记细胞表面抗原,形态学鉴定通过荧光显微镜或流式细胞术进行鉴定通过观察细胞形态、排列、生长特点等,初步鉴定细胞类型分子生物学鉴定检测细胞基因和蛋白质表达,通过PCR、Western blot等技术进行鉴定细胞转化与基因编辑技术转染技术利用脂质体、病毒载体等方式将外源基因导入细胞内,实现基因表达基因编辑技术利用CRISPR-Cas9等基因编辑工具,对细胞基因进行定点敲除、插入或突变细胞保存与复苏技术低温保存将细胞置于-196℃的液氮中长时间保存细胞复苏从液氮中取出细胞,快速解冻后用培养基培养细胞,使细胞重新生长繁殖04动物细胞组织培养的实验操作实验准备培养基制备细胞来源实验器材无菌操作准备适宜的动物细胞生准备培养瓶、吸管、显确保细胞来源可靠,并长的培养基,确保培养微镜、离心机等必要的确保实验全程在无菌条经过必要的消毒和检测,基的营养成分、pH值和实验器材,并进行消毒件下进行,以避免污染以避免污染渗透压适宜处理实验步骤与注意事项原代培养从动物组织中分离出细胞,并进行初次培养注意事项避免对组织过度机械刺激,保持组织完整性传代培养将细胞从原代培养中分离出来,并进行再次培养注意事项控制细胞的分裂速度,避免细胞过度生长细胞鉴定通过形态学观察、免疫荧光等技术对细胞进行鉴定,确保细胞的种类和来源注意事项选择适当的鉴定方法,确保准确性细胞观察与记录定期观察细胞的生长状态、形态变化等,并记录数据注意事项保持观察的连续性和准确性实验结果分析细胞生长曲线绘制基因表达分析根据观察数据绘制细胞生长曲通过PCR、Western blot等技线,分析细胞的生长特性和规术分析细胞中特定基因的表达律情况细胞形态学分析细胞功能检测观察细胞的形态变化,分析细根据实验目的,对细胞进行特胞的分化、凋亡等情况定的功能检测,如药物筛选、毒性测试等05动物细胞组织培养的挑战与前景培养细胞的污染问题污染来源污染的危害防止污染的措施培养细胞的污染主要来自培养环培养细胞的污染会导致实验结果严格控制培养环境,定期对培养境、操作过程和细胞自身,如空不可靠,甚至危及实验动物和人器皿、操作工具进行消毒,规范气、水、培养器皿、操作工具等类的健康操作过程,定期检测培养细胞的污染情况培养细胞的遗传稳定性问题遗传不稳定性的表现培养细胞的遗传不稳定性表现为细胞增殖能力下1降、染色体异常、基因突变等遗传不稳定性的原因培养细胞的遗传不稳定性主要与细胞分裂过程中2DNA复制和修复过程中的错误有关提高遗传稳定性的措施采用低温保存、添加保护剂、优化培养条件等方3法,降低细胞分裂过程中DNA复制和修复过程中的错误率培养细胞的异质性问题异质性的表现培养细胞异质性表现为不同批次、不同来源的同一种细胞在形态、生长、分化等方面存在差异异质性的原因培养细胞异质性主要与细胞在生长和分化过程中受到的微环境因素、基因突变等因素有关解决异质性的措施采用标准化操作流程、优化培养条件、选用同质化细胞系等方法,降低培养细胞的异质性动物细胞组织培养的前景展望动物细胞组织培养在科学研究、随着技术的不断进步和应用领未来需要加强技术研发和人才生物工程、医学等领域具有广域的拓展,动物细胞组织培养培养,推动动物细胞组织培养泛的应用前景将迎来更多的发展机遇和挑战技术的不断创新和应用THANKS感谢观看。