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蛋白质研究方法PPT,a clickto unlimitedpossibilities汇报人PPT目录0102添加目录项标题蛋白质研究概述0304蛋白质分离纯化技术蛋白质序列分析方法0506蛋白质表达研究方法蛋白质相互作用研究方法07蛋白质组学研究方法Part One单击添加章节标题Part Two蛋白质研究概述蛋白质的结构与功能蛋白质的基本结构由氨基酸通过蛋白质的折叠蛋白质在细胞内通肽键连接而成过折叠形成特定的三维结构添加标题添加标题添加标题添加标题蛋白质的功能参与生物体的各种蛋白质的修饰蛋白质在细胞内通生命活动,如催化、运输、免疫等过修饰(如磷酸化、糖基化等)改变其结构和功能蛋白质研究的重要性蛋白质是生命蛋白质是药物蛋白质是生物蛋白质是营养活动的基础,研发的重要靶技术的核心,物质的重要组研究蛋白质有点,研究蛋白研究蛋白质有成部分,研究助于理解生命质有助于开发助于推动生物蛋白质有助于现象新药技术的发展改善人类营养状况蛋白质研究方法分类蛋白质分离技术如凝胶电泳、离子交换色谱等蛋白质鉴定技术如质谱分析、免疫印迹等蛋白质结构分析技术如X射线晶体学、核磁共振等蛋白质功能研究技术如酶活性测定、蛋白质相互作用等Part Three蛋白质分离纯化技术蛋白质的提取与分离蛋白质提取从生物样品中提取蛋白质蛋白质分离将提取的蛋白质进行分离,得到纯化的蛋白质蛋白质纯化通过色谱、电泳等方法对蛋白质进行纯化蛋白质鉴定通过质谱、免疫学等方法对纯化后的蛋白质进行鉴定蛋白质的纯化技术离心法利用离心力将蛋凝胶过滤法利用凝胶的离子交换色谱法利用蛋白质与其他物质分离孔径大小将蛋白质分离白质的电荷性质进行分离亲和色谱法利用蛋白质反相色谱法利用蛋白质超速离心法利用超速离与特定配体的亲和力进行与固定相的疏水性进行分心力将蛋白质与其他物质分离离分离蛋白质纯度鉴定蛋白质纯S DS-H PL C鉴质谱鉴定蛋白质纯蛋白质纯度鉴定结度鉴定方P AG E鉴定利用利用蛋白度鉴定标果分析法SDS-定利用蛋白质的质的质谱准纯度根据鉴定P AG E、蛋白质的色谱行为图进行鉴大于95%,结果,判H PL C、电泳迁移进行鉴定定无杂质干断蛋白质质谱等率进行鉴扰的纯度是定否符合要求Part Four蛋白质序列分析方法蛋白质的氨基酸序列分析氨基酸序列分析通过分析蛋白质的氨基酸序列,了解蛋白质的结构和功能氨基酸序列分析方法包括质谱分析、核磁共振分析、X射线晶体学等氨基酸序列分析的应用在药物研发、疾病诊断、生物工程等领域有广泛应用氨基酸序列分析的挑战蛋白质的氨基酸序列非常复杂,分析难度较大蛋白质的肽谱分析原理通过质谱技术对蛋白质进行应用蛋白质结构研究、蛋白质相序列分析互作用研究、蛋白质功能研究添加标题添加标题添加标题添加标题步骤样品制备、质谱分析、数据优点快速、准确、灵敏度高解析蛋白质的质谱分析原理通过测量蛋白质分子应用蛋白质鉴定、蛋白质的质量,确定其氨基酸序列相互作用研究、蛋白质结构分析等质谱技术一种分析蛋白质优点快速、准确、灵敏度分子质量的方法高,适用于大规模蛋白质分析Part Five蛋白质表达研究方法基因克隆与表达载体构建基因克隆通过表达载体构建载体选择选择转化与筛选将P CR技术将目的将目的基因插入合适的表达载体,构建好的表达载基因克隆到表达到表达载体的特如p ET系列、体转化到宿主细载体中定位置pGEX系列等胞中,并通过筛选获得高表达细胞系重组蛋白的表达与纯化重组蛋白表达通过基因工程技术蛋白纯化通过离心、层析、电泳将目的基因导入宿主细胞,使其表等方法将目的蛋白从细胞中分离出达出目的蛋白来,得到纯化的蛋白添加标题添加标题添加标题添加标题宿主细胞选择根据目的蛋白的特蛋白鉴定通过SDS-PAGE、性选择合适的宿主细胞,如大肠杆Western blot等方法鉴定目的蛋菌、酵母、哺乳动物细胞等白的表达和纯化效果蛋白质表达的检测与鉴定l蛋白质表达检测方法Western Blot、ELISA、免疫荧光等l蛋白质表达鉴定方法基因克隆、蛋白质纯化、蛋白质测序等l蛋白质表达定量方法荧光定量PCR、蛋白质印迹法等l蛋白质表达调控研究基因表达调控、蛋白质翻译后修饰等Part Six蛋白质相互作用研究方法酵母双杂交技术原理利用酵母细胞内的蛋白质相互作用,筛选出与目标蛋白相互作用的蛋白质优点灵敏度高,特异性强,可以检测到低丰度的蛋白质相互作用应用广泛应用于蛋白质相互作用的研究,如信号传导、细胞周期调控等局限性需要酵母细胞作为载体,可能受到酵母细胞内其他蛋白质的影响免疫共沉淀技术原理利用抗体与目标蛋白结优点可以检测到低丰度的蛋合,通过共沉淀技术分离出相白质相互作用互作用的蛋白质应用广泛应用于蛋白质相互缺点可能存在非特异性结合,作用的研究,如信号传导、细需要进一步验证胞周期调控等荧光共振能量转移技术蛋白质互作网络构建与分析蛋白质互作网络蛋白质相互作用形成的网络结构构建方法生物信息学、实验生物学等方法分析方法网络拓扑结构分析、蛋白质功能预测等应用药物设计、疾病诊断和治疗等Part Seven蛋白质组学研究方法蛋白质组学研究技术概述蛋白质芯片通过检测蛋白质与芯片上固蛋白质组学研究蛋白质在细胞、组织或生物定化的抗体或配体的结合,确定蛋白质的体中的表达、修饰、相互作用和功能存在和数量蛋白质组学研究方法包括质谱分析、蛋白质蛋白质相互作用分析通过检测蛋白质与蛋白芯片、蛋白质相互作用分析等质的相互作用,确定蛋白质的功能和调控机制质谱分析通过测量蛋白质的质量和电荷,确蛋白质组学研究技术的应用包括疾病诊断、定蛋白质的种类和数量药物研发、生物标志物发现等蛋白质组学研究中的样品制备技术l样品采集选择合适的样品,如细胞、组织、体液等l样品处理包括样品的洗涤、破碎、离心等步骤l样品分离使用色谱、电泳等方法对样品进行分离l样品纯化使用亲和层析、离子交换等方法对样品进行纯化l样品定量使用质谱、荧光定量等方法对样品进行定量分析l样品保存使用冷冻、干燥等方法对样品进行保存,以备后续研究使用蛋白质组学研究中的分离技术微阵列技术液相色谱法离子交换色亲和色谱法凝胶电泳法质谱法利利用蛋白质利用不同蛋谱法利用利用蛋白质利用蛋白质用蛋白质的与特定配体白质在流动蛋白质的电与特定配体的电荷、分质量和电荷之间的特异相中的溶解荷差异进行之间的特异子量和形状差异进行分性结合进行度和吸附性分离性结合进行差异进行分离分离,具有高通量、高差异进行分分离离灵敏度的特离点蛋白质组学研究中的鉴定技术质谱分析通过测量离子的质量和电荷来鉴定蛋白质蛋白质芯片技术通过检测蛋白质与芯片上的抗体或配体的结合来鉴定蛋白质蛋白质测序技术通过测序来鉴定蛋白质的氨基酸序列蛋白质相互作用分析通过检测蛋白质之间的相互作用来鉴定蛋白质THANKS汇报人PPT。