《质粒DNA提取鉴定》课件

质粒提取鉴定DNA在分子生物学中，提取是研究的第一步本课件将介绍质粒DNA DNA DNA提取的步骤以及后续扩增和测序的原理和分析方法PCR什么是提取？DNA提取是将从细胞中提取出来的过程在提取过程中，可以采取不同的方法，以提高DNA DNA的提取效率和提高提取到的的纯度DNA DNA效率纯度提高细胞裂解效率去除，蛋白等杂质，提高纯度RNA应用，测序等基因分析应用PCR DNA质粒提取步骤DNA质粒提取通常分为裂解、沉淀、洗涤、再悬解几个步骤其中，关键是如何用最简单最快速最稳定的DNA方法使细胞裂解，并保护的完整性，同时避免、蛋白等污染DNA RNA细胞裂解沉淀洗涤利用裂解缓冲液裂解细胞加入乙醇沉淀多次用缓冲液洗涤去除杂质DNA再悬解用适当溶液再悬解DNA浓度及纯度检测DNA测量浓度的常用方法有比色法、荧光法和分光光度法检测纯度的指标有值或DNA DNAA260/A280值，该值越接近，越纯确定浓度和纯度是接下来扩增的重要步骤A260/A

2301.8DNA DNA PCR检测浓度1DNA比色法、荧光法、分光光度法等检测纯度2DNA值或值等A260/A280A260/A230扩增3PCR准确测定的浓度和纯度，有助于选择合适的模板量DNA DNA反应原理介绍PCR聚合酶链式反应（）是一种用于扩增序列的技术利用聚合酶酶在适宜的温PCR DNAPCR DNA度和离子浓度下，在的双链模板上扩增特定的片段DNA DNA目的材料12复制或扩增样本核酸模板，引物，，酶，缓冲液等DNA dNTPsTaq步骤3变性，退火，延伸等步骤扩增结果分析PCR扩增后，可通过多种方法进行检测分析，如电泳分析、比色法、微量热卡等产物特异性检测方法通PCR pcr过分析扩增产物，可以确认的序列以及测序技术所需的模板数量和质量PCR DNA电泳分析比色法微量热卡可根据产物的大小、数目和可以快速、准确地定量产实时监测扩增反应，可以pcr PCRPCR出现条带情况分析结果物快速检测特异性测序原理DNA第一代测序使用不同于反应法的技术，如方法第二代和第三代测序使用的是高通量测序技术，分别Sanger是技术和技术通过测序，我们可以得到样本中的序列信息，包括基因、启动子等454Illumina DNA第一代测序第二代测序第三代测序测序是一种垂直测序方技术是一种并行定量测新一代测序技术中的一种，是一Sanger Illumina法，利用生物学合成链的能序，具有高通量、低成本、高精种长读长片段的快速测序技DNADNA力进行度、高可靠性等优点术结论与展望本课件主要介绍了提取、扩增和测序技术的原理和分析方法在实DNAPCR际应用中，这些分子生物学技术在疾病的诊断和镇痛作用，给科学研究带来了许多价值未来的应用研究，有望为人类的健康福祉和社会进步做出更多的贡献。