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基因克隆的载体克隆技术是现代生命科学研究的重要手段之一基因克隆技术作为克隆技术的重要组成部分,因其应用领域的广泛性及重要性而备受关注本课程将为您详细介绍基因克隆的载体知识载体的定义和特点定义特点类型基因克隆载体是指具有自主常见的基因克隆载体质粒具常见的载体类型包括质粒、复制能力的分子,具有有如下特点噬菌体、和等DNA Cosmid BAC携带外源片段进入细胞大小适中;DNA
1.和定向操纵目的基因表达等构建简单方便;
2.功能易于操作且可大量扩增;
3.可以自主复制;
4.便于基因操纵和定向表达
5.等常见的基因克隆载体质粒噬菌体最常见的基因克隆载体,易于操作且可大量扩增适用于大批量表达分泌蛋白的研究,转化后可产生高水平的基因表达CosmidBAC可容纳大型外源片段,适用于聚合酶连锁反适合于构建大型基因组文库和物种基因组序列的物DNA应、基因组文库构建和定位大片段序列等研理遗传图谱DNA/究基因克隆的步骤下载或制备载体1获取可自主复制的载体,或通过人工合成的方法制备载体载体的线性化2将载体在目标区域产生线性剪切,为目标基因的插入创造条件获得目标基因3从源生物体中提取目标基因,通过扩增、限制酶切剪切等方法,获得目标PCR基因克隆载体的转化转化方法的介绍转入受体细胞包括热激转化、电转化等传统方法以及冷冻惊叫转将制备好的目标载体转入特定的受体细胞中,并培化、基因枪转化等新兴方法养、筛选、鉴定等,最终获得基因工程菌株基因克隆的验证检测重组载体验证目的基因的插入12常用方法包括,南方杂交等通过检测常用方法包括和PCR SequencingSouthern目的基因的插入,判断载体是否重组成功等,验证目的基因是否插入到载体blotting中总结和展望总结展望基因克隆载体是基因克隆技术的重要组成部分,随着人们对克隆技术的不断深入研究,其应用应用领域广泛核心在于选取合适的载体、构领域也越来越广泛,基因克隆技术也将在药物建载体、将基因植入载体并最终将载体转化到研发、农作物改良等方面发挥更大的作用受体细胞中。