样品前处理中滤膜选择方法

样品前处理中滤膜选择方法不知道大家有没有遇到过这样恼火的事情——刚刚购买的色谱柱，进样不到20针，主峰竟然分叉！！而且，不管如何洗脱都无法恢复……浪费资金不说，还严重影响实验进度咨询工程师归结原因为样品太脏造成筛板塌陷难道滤膜选择有问题？心塞啊！孰是孰非已说不清楚唯有继续严谨把控样品前处理，保护色谱柱和液相进样系统对于分析工作来说，样品前处理是必不可少的环节，同时也是一项技术性工作不管超声，还是振荡，保证主药溶解以后，都要进行过滤再进入液相系统其中滤膜的作用至关重要今天我们就来说说滤膜的事情为什么要拿这么简单的滤膜选择的事情出来讲，有一个至关重要的原因，哪个新手没有因为滤膜毁掉一次实验.有机试剂一不小心用了水系膜结果差点把某些杂峰给当成未知杂质.做溶出滤膜孔径不合适，结果取出来的样滤不过去手忙脚乱重新找膜差点耽误一整锅溶出.不做滤膜吸附试验，差点以为原研的溶出不合格所以，在试验开始之前大家都先把这篇文发给新手看一下!滤膜最重要的功能是啥？答分析系统的大门，保护作用！微孔滤膜是利用高分子化学材料，致孔添加剂经特殊处理后涂抹在支撑层上制作而成主要用于色谱分析中流动相及样品的过滤，对保护色谱柱及输液泵管系统和进样阀等不被污染具有良好的作用.过滤以后的溶剂和样品会对色谱柱和液相进样系统起到保护作用对色谱柱的影响由于填料颗粒很细色谱柱内空隙极小，溶剂和样品中的细小颗粒会使色谱柱和筛板堵塞对液相进样系统的影响溶剂和样品中的细小颗粒会增加进样阀的堵塞和磨损，同时也会增加泵头内的蓝宝石活塞杆和活塞的磨损.消除由于污染对分析结果的影响对于常用的紫外检测器和二极管阵列检测器如果样品浓度比较低，颗粒会造成噪声比较大，基线不稳，感染正常信号，影响检测结果常用滤膜类型常用滤膜分为水系和有机系两种水系膜水系滤膜通常为混合纤维素酯滤膜，使用前常需进行水浸处理，防止滤膜使用时未压紧有气泡入内，同时水浸可以使膜充分溶胀有机膜有机系滤膜有尼龙滤膜、聚偏氟乙烯滤膜、聚四氟乙烯滤膜等，使用前不需预先湿润几乎能与全部溶出介质相容使用过程中，根据所过滤样品选择合适的滤膜聚四氟乙烯膜（PTFE）/聚偏氟乙烯膜（PVDF）:惰性较强，适用于所有溶剂，酸和盐，并无任何可溶物尼龙滤膜（N

6、N66）:通用型，满足纯水样品和水/有机混合样品适用于绝大多数有机溶剂和水溶液，可用于强酸，70%乙醇，二氯甲烷，不适用于二甲基甲酰胺再生纤维素膜（RC）:适用于水溶性样品和有机溶剂聚醛飒滤膜（PES）:适用于水溶性样品的过滤，不适用于酮类、酯类、油类等极性溶液及高浓度的酸溶液混合纤维素酯膜（WX）:适用于水溶液，不耐酸、碱、有机溶剂偏氟膜（F膜）:适用于有机溶剂及空气过滤可用于有机溶剂除微粒，提高试剂级别等如何选择滤膜对于滤膜选择主要从材质和孔径两方面来来考虑材质的筛选有机系滤膜用于有机相或者有机相溶液的过滤，如过滤水溶液错选了有机膜会导致过滤流速极低或者干脆无法过滤水系滤膜只能过滤水溶液，过滤有机相溶液时，滤膜会溶解掉，溶有滤膜的溶剂会对液相仪器以及色谱柱造成严重损伤水/有机混合流动相的过滤，首选有机相滤膜如果混合流动相中有机相的比例偏少可先用有机溶剂（甲醇或乙睛）将滤膜润湿以后再进行流动相的过滤过滤溶剂或者流动相一般用溶剂过滤器+膜过滤过滤样品一般用针式过滤器膜直径为13mm可以过滤

0.5-2ml的样品，如果样品量更大，可以选择直径为25mm的孔径的选择常用滤膜的过滤原理一般为机械截留，即截留比它孔径大或孑L@相当的微粒等杂质因此滤膜的孔径直接决定了选择性常用滤膜的孑宙从

0.1pm到10|jm不等溶出、紫外、液相等分析检测常用滤膜的孔径通常为

0.22M、

0.45pm和

0.8pm

00.22um:去除样品，流动相中极细颗粒，适用于要求较高的溶剂和样品的处理，如色谱用离子对试剂、超纯水、质谱分析溶剂的样品等的过滤

0.45um:能滤过大多数微生物，适用于常规样品、流动相的过滤能够满足一般色谱要求

0.8um:去除大多数不溶性微粒，适用于紫外等对样品要求相对较低的分析检测，尤其适用于难溶性辅料多、混悬剂和粘合剂用量大、且使用紫外检测的口服固体制剂溶出检测针式过滤器使用窍门针式过滤器是大家做溶出、和液相样品前处理最常用的一天不知道会有多少次，小编今天就讲一些大家平时很少注意的小窍门.在吸入样品前先向注射器中吸取约1ml的空气，可以使液体残留量最小；.样品吸入注射器中，倒置注射器并将顶端的残留物擦净，将针式过滤器连接到注射器上，轻轻拧紧保证良好密封；.将注射器内的样品过滤后注入进样瓶中；.取下过滤器，将空气吸入注射器，重新连接过滤头，按下推杆过滤出所有残余样品最大程度提高样品回收率温馨提示在过滤过程中，最好不使用小于10ml的注射器，以免压力过高引起液体崩漏滤膜吸附试验的设计滤膜使用前需进行考察，明确是否对待测成分有吸附作用无论溶出度，还是含量、有关物质，如果滤膜有影响会导致后续产出的结果都是错的无论药物结构如何，在试验开始之前考察一下总是对的针对不同的分析检测项目，判断滤膜吸附及验证的方法略有不同溶出度测定开始溶出试验前，滤膜吸附试验是必须进行的滤膜吸附试验方法如下1取对照品溶液按规定的方法，对比未过滤直接进样和过滤后的吸光度/峰面积值2或采用原料加空白辅料的方式配置溶液分别用高速离心和滤膜过滤的方法处理对比离心上清液和过滤后溶液的吸光度/峰面积3分别弃去不同体积的初滤液的考察，参考下表以上方法仅供参考实际项目不同操作方法不同，请根据实际情况进行调整♦判定标准滤膜吸附应在2%以下按下述公式计算回收率或吸附率回收率Recovery%=A过滤/A过滤前或离心xlOO%吸附率=100%-Recovery%其中A为UV吸光度或HPLC峰面积值若回收率在98%〜102%之间，即吸附率不超过2%滤膜吸附作用可忽略不计♦滤膜吸附过大处理方法如下1将滤膜在水中煮沸lh以上后再次尝试；2更换滤膜材质或者品牌或者采用进口滤膜不同的滤膜、不同的处方工艺生产的产品，其吸附作用不尽相同应通过实验得出正确结论若滤膜对原料药不存在吸附现象，但是样品溶出度偏低可以考虑是否存在辅料吸附API然后被滤除的现象对于具有明显吸附的品种，应在内控标准中标明所用滤膜的材质、品牌和规格，以及需要弃去初滤液的体积，以确保检测结果准确，可重现♦什么样的样品容易产生滤膜吸附现象发生吸附的品种，往往是主药均难溶于水，制成制剂时进行过微粉化等处理这时原料药粒径变小，比表面能变大，静电吸附能力增强所以与滤膜的吸附作用会比较明显一些小规格制剂溶出液中主药浓度低，达到倾口所需的初滤液体积明显增加，干扰也会变大含量测定、有关物质测定含量和有关物质使用的溶剂一般都能使样品中主药完全溶出，因此使用样品溶液考察吸附性即可而对于有关物质检测，如果所用溶剂中有机相比例较高更需要关注滤膜过滤后是否会产生新的杂质滤膜材质孔径pm直径mm奔去体积ml尼龙

0.

45131、

2、

3、5尼龙

0.

45251、

2、

3、5对照品溶液或原料+空白辅料溶液聚受限

0.

45131、

2、

3、5聚夏飒

0.

45251、

2、

3、5聚四氯乙烯

0.

45131、

2、

3、5聚四氟乙烯

0.

45251、

2、

3、5。