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无菌环境如何维持嘉峪检测网2020-10-2016:16在微生物实验室,必须达到一定程度的无菌状态,避免微生物污染假如在一个不洁的实验室或者早先打翻过样品的地方做微生物实验,引入新的微生物污染样品的几率是很大的微生物的实验可以分为两大部分前期准备和样品检验事实上,保持整个实验室清洁是非常重要的这样就不用在灭菌前担心太多了,然而,灭菌后必须保证样品或者培养基免受污染其实,可以把灭菌想像成“一扇门,在培养基中或者一些设备比如吸管的微生物都在灭菌过程中被杀死了,没有微生物困扰实验了必须保证灭菌后的环境(门后的部分)的洁净,杜绝灭菌后的培养基和设备受到污染无菌的重要性无菌技术-高压湿热灭菌当移动培养基或者样品时,安全用品包含口罩,手套和眼部防护应小心注意以避免溅出或者泼出;口罩防止培养基和样品受到污染,可能来自于咳嗽或者鼻涕;根据突然的移动会产生安全危害当地的要求和习惯,每个实验室会有不同的要求或者导致实验无效;戴手套是为了防止培养基或者其他刺激性物质接触皮肤;在从湿热不要使用夸张的动作或者行灭菌锅内取出容器或则器皿时,需要戴防热手套为在配置培养基和实验中佩戴防护眼镜是一个很好的习惯,能够购买同时,不要把任何东西,比带有屈光度的防护眼镜为佳如吸管,放到嘴里微生物防护用具.一级防护(设备)移液辅助器,如移液器生物安全柜一次性塑料接种环、电热接种环螺口盖试管及瓶子高压灭菌器一次性塑料移液管.二级防护(人员)工作服、防护服手套(乳胶手套等)安全眼镜、面罩或其他防护用品检测中常见问题解答细菌和霉菌培养箱必须分开放置吗?在CNAS-CL01-A001-2018《检测和校准实验室能力认可准则在微生物检测领域的应用说明》有此规定
6.
3.4b)2)检测样品中的霉菌时,要有适当的措施控制泡子在空气中的扩散但未见到明确规定细菌培养箱和霉菌培养箱不能在同一房间的规定一般实验室都有三种培养箱,结构设计上分为两种,一种是内部循环风温度平衡的,第二种是内外热空气流动自动平衡型的另外第三种是热辐射温度平衡型的有网友认为,第一种和第三种应该可以放在一个实验室,保持一定距离即可第二种培养箱应该不能放在一个实验室据说CNAS现场评审,会提出细菌和霉菌培养箱分开放置要求无菌技术-过滤Filtration无菌过程注意点穿着干净的实验服,袖子应卷起至肘部以避免碰到培养基或样品带来污染实验服当然做实验前要洗手实验的无菌技术注意点废弃物在实验过程中暴露于微生物的物品应作为有害废弃物这些废弃物可能含有微生物并致病;假如含有致病菌可能会产生公共卫生的事件.最好废弃物能够进行湿热灭菌从微生物的实验室布局角度一个设计合理的实验室能提供一个合格的环境以支持实验能够安全有效地进行首先,需要为实验室选择一个合适的物理位置远离其他操作区域,比如,生产或者储运;没有从其他区域进入实验室的直接入口;实验室必须是微生物实验专用;应有专门微生物检测无菌间,并通过缓冲间与准备间等进行区隔空调系统的排气必须直接排只有那些被允许进入实验室的工作中人员的碰撞,也避免了交叉污出实验室,空调系统应定时人员才能进入染清洗,并关注空气过滤器的清洁遵照GLP相关的安全规则
1.GLP要点-工作区域
2.GLP要点-洁净工作台一个有效的实验室应该是一个安全的实验室假如疏忽安全的话,许多每天使用的培养基或者设备会产生危害减少这些危害带来的风险不仅仅保护了工作场所,更重要的是,保护了自身免于危险利用常识并遵照GLP相关的安全规则,我们就能把由于微生物相关的行为带来的潜在危害降低到最小安全用品移动要点描述原理在压力T产生的湿热的蒸汽杀死微生物的吕养体和泡子明火湿热火国锅实验中需要用到酒精灯或其他明火,但是假如使用不当会带来比较高的安全危险;湿热灭菌锅使用高压下产生的蒸汽,温度可达121℃杀死了微生物,同样可以带来人类组织的灼伤,所以必须特别小心地操作;确保酒精如不用时完全关闭,当有阀门时经常检查垫圈是否有裂痕或者泄露;如此高的温度以及蒸汽能带来极大的潜在伤害,即使是残留的蒸汽也能带来很大的危险打开火菌锅时需要特别小心,站在边上避免面对热量和蒸汽,缓慢的打开门,同时,戴好防热手套.操作酒精灯时,应确保火焰不会接触衣物或者皮肤可燃物品,比如记录本,应远离火焰以避免意外点燃;把需要灭菌的培养基和器皿平均放置在托盘上,大的物品放在边上,确保物品不会相互碰撞这样可以是热量均匀扩散并平衡整个托盘同时,要注意可燃液体的容器每次使用后应盖好盖子并远离酒精灯火焰;使用火焰进行火菌,作时可使用银子把银子放在含有95%酒精的烧杯中使用时把银子在火焰上灼烧1-2秒,移开银子并等待火焰熄灭;拿着镜子是尖端应向卜,使热的酒精不会流到手上洁净台样品操作在洁净台工作时必须关闭紫外灯,紫外光线是危险的;培养基和样品用火焰灼烧瓶口时,停留4-5秒,旋转使整个表面都能被灼烧,不要停留太久,不要溅出样品或者培养基;不要J畔或者手指放在紫外灯下,以免灼伤皮肤;假如样品是瓶装的,不要直接灼烧以免爆开可以取2个烧杯,倒入70%酒精,把瓶子倒置放入一个烧杯中,使蛊子和瓶颈的
2.5厘米处能浸没在酒精中,拿出瓶子用干净的布擦干;同理,放入第二个烧杯,拿出瓶子直立待酒精自然蒸发;不要直接看紫外光线以免损伤眼睛开瓶时应特别小心不能污染样品,可以用消毒纸巾开旋盖的瓶子;用浸没在95%酒精并灼烧的开瓶器打开压盖瓶;打开瓶子后,使用相同的方法灼烧瓶口,并确保用于消毒的酒精完全挥发;拉罐可以使用相同的程序或者用含70%酒精的棉球擦拭顶部,假如罐子必须用开罐器,这个开罐器操作同开瓶器;尢菌包装的产品用含70%酒精的棉球擦拭密封灭菌锅必须密闭以阻隔外部空气,避免空气的存在会影响压力并降低灭菌锅里面的温度灭菌压力在灭菌锅内,合适的灭菌温度是通过压力达到的,压力对于灭菌没有效用但是使蒸汽温度上升对于标准操作来说,15lbs/inch2时的121工并赶走所有空气可以达到灭菌的效果火菌时间当到达一定的温度和压力时,需要保持一定的时间来达到效果,为了杀灭微生物,1210c必须保持至少15分钟培养基的灭菌大部分情况下,实验室配置培养基后应灭菌,灭菌时应根据供应商指导,使用合适的温度时间;有些培养基不适合火菌的器皿的火菌当灭菌器皿时,需要考虑使用数量,比如,一天用10根吸管,在灭菌时,一般就可以以10根为一包,这样可以减低器皿在使用过程中遭受微生物的污染的可能性火困条在灭菌过程中,可以用灭菌条来监控效果灭菌条在灭菌刖是有颜色的,灭菌后会变成黑色重新灭菌假如一次灭菌无效,可以重新进行火菌过程,但是,培养基是不可以进行第二次灭菌的,应抛弃储存灭菌完成后,培养基和器皿应妥善储存一般来说,培养基应存放于避光的洁净空间,同时应参照供应商的指示要点描述简述物理分离方法,使用高效过滤将微生物从液体培养基分离由于不需要加热和冷却过程,过滤比高温湿热灭菌省时间过滤头
0.2微米的过滤头可以分离所有的细菌营养体,把它安装在针筒末端要点描述综述一旦培养基或者器皿经过灭菌过程这种灭菌状态应保持直到实验结束区域最好能把培养基准备区域(门外)和实验区域(门内)之间应该设有缓冲间工作台面工作前必须消毒可以用70%的酒精也可以用含氯的消毒剂消毒时间不管使用何种消毒剂,需要提供充分的消毒时间来杀灭微生物,一般5-10分钟可以用纸巾擦十表面洁净台必须有2个光源普通照明用和杀菌紫外光紫外灯用于保持工作台面免于微生物污染在使用前仍然需要使用消毒剂清洁摆放应该有好习惯把工作桌面的物品摆放好,把移动放到最低限度,避免带来污染银子如果使用薄膜过滤法,需要准备一个小烧杯并有少量酒精,镜子不用时就放在杯子里培养基培养基使用前,应该有相关日期,比如配置日期或者实验室收到日期(直接使用的培养基)假如没有所需日期这个培养基不能使用采样个人卫生酒精灯样品应无菌采得万一培养基或者样品溅到实验服上,应在做完一个实验后换上干净的使用本森灯或者酒精灯,在实验前点燃使用无菌采样袋或者采样瓶咳嗽或者鼻塞可能会带来微生物并影响实验,应戴好防护手套面罩火焰在实验区域产生一个防护层,可以防止那些悬浮在空气中的微生物掉落在工作台面上或者培养基上采样员应戴防护手套,在采样前烧采样口样品容器应紧闭并安全储存开瓶瓶口培养皿开瓶前,应用清洁剂的纸巾清洁瓶盖当打开培养皿时,不能完全移除盖子,而应该保持在培养皿的上侧,从而能够倒入和附近区域,除去盖子打开后玻璃瓶口应进行灭培养基或者样品,这样可以减少空气灰尘盖子上可能留存的菌,可以在酒精灯上方旋转瓶口或者微生物的污染微生物和螺纹,一般2-3秒倒元培养基或者样品后,瓶口重新过火,盖盖子,用消毒剂清洁滤膜镜子打开薄膜包装,绝对不能碰到薄膜!用镜子转移滤膜用银子把薄膜移除包装并放到过滤头上,过滤的漏斗不能完全移开,只需移开一点点放入滤膜即可过火时拿住镜子的尾部,放到火焰上,保持一下能够到火就好,时间太长会在尖部结碳过滤完后,用银子把滤膜转到培养皿中,放置于中间拿银子的时候,尾部向上直至烧完实验结束打扫实验结束后,培养皿放入培养箱;剩余的培养基可以放回储存区域,盖子必须盖紧抛弃废弃物比如样品袋;可回用的物品放在远离工作区域的地方以回收清洗火菌用含有消毒剂的纸巾清洁工作台面通即口气流安保工作区域微生物实验室应该有单独的通风系统,与其他操作区域的空气供给分开;实验室应该是限制进入的,可以是卡片控制或者其他方式,实验室人员应该有允足的工作区域,从GLP标准来说,每人应有20平方米的区域充足的工作区域可以避免易清洁照明实验室的墙面,屋顶和门都应该是平滑的,光洁易于清洗消毒的;墙的接绛包括强和墙之间,强和地面之间应该是弧形的;任何地方都应该不能聚集灰尘,例如窗台或者窗帘;柜子应该是可移动的或者是不着地的以方便清扫实验室应有充足的照明包括不间断电源或者备用发电机.要点描述总体安排实验刖应做好仪器,试剂和培养基的所有准备工作,这样可以合理利用时间并得到稳定的实验结果桌面安放多余的培养皿,烧瓶或者滤纸可能会干扰实验并带来潜在的溅出,打碎或者父叉万染实验前消毒在配制培养基或者开始试验前应该清洁并消毒工作桌面可以采用70%的酒精溶液含氯水的溶液,或者具他消毒剂清洁后应等待几分钟以使有充分的时间杀灭微生物试验后消毒实验结束后,彻底清洁工作区域,仍然使用70%酒精溶液或者具他消毒剂保持一段时间,然后擦干有害废弃物的处置必须有效管理微生物的有毒废弃物,任何和微生物培养或者培养基相关的物品都应被看作有害物质;因为他们可能含有致病菌,需要小心处理废弃物的灭菌湿热灭菌是最简单也是最有效的处理污染物质和有害物质的方法用过的培养皿应放在灭菌袋中灭菌后,可以当作一般废弃物处理重复使用器皿的火菌当需要对小件物品(比如移液管)火菌时,可以根据实际用量分组包装湿热火困后,袋包装冷却并保存避免浪费合理安排是非常重要的;实验室JL作需要精准,但是有时候我们也需要快速工作因为花非常多时间会延长设备,培养基,或者样品暴露在环境中的时间把需要用的物品放在手边可以用的地方可以节约时间并提图,作的有效性简介使用监控洁净工作台提供了控制来自环境的污染并提供工作区域的洁净空气洁净空气吹向工作区域,同时,可以避免外部空气进入工作区域使用时,紫外光线(或者紫外灯)应关闭,但是使用后应打开如果紫外灯没有打开_L作台没有开启,工作台不能开始使用;必须清洁工作台,开扇电源并打开紫外灯,保持30分钟洁净工作台需要进行日常的确认,一般有第三方公司进行。