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抗体保存指南!大部分抗体活性都可以维持数月甚至数年本指南以abeam抗体保存方法为主,同样也可以应用到其他绝大部分公司的抗体产品!请谨记!无论何时请按照说明书推荐的保存条件正确保存抗体!.收到抗体后请务必在12000rpm离心20・30s后再打开管盖进行分装和保存!质优的抗体使用非常特殊的储存管,只有在12000rpm离心20-30s才能将附着在管壁或盖内的抗体全部离心下来即使是在10000rpm离心也会导致离心不完全,导致出现抗体的量不足的现象!.对于大部分抗体,比较合适的保存方式是分装后保存在-20度or・80度对绝大多数抗体来说,保存在-20度是完全足够了没有任何证据显示保存在-80度会有更多的好处!分装可以最大程度的降低反复冻融对抗体活性的损害,同时也降低了由于多次从同一管中吸取抗体造成的污染可能性分装的量以一次实验用完为好,最少不能少于10ul每份因为分装体积越小抗体的浓度越可能会受到蒸发以及管壁吸附的影响复融后的分装抗体如果一次用不完,将剩余母液保存在4度,避免再冻起抗体工作液应该当天配制当天用完,在4度尽量不要超过1天绝对避免将抗体保存在自动除霜冰箱中尽量将抗体保存在冰箱里层,而不是门上.大部分抗体收到后4度短暂保存1・2周对抗体活性是没有影响的如果抗体很快(1-2周)会使用,推荐在4度保存,这是为了避免反复冻融对抗体活性的损害如果要长期保存则最好是在-20度or-80度最关键的一点是要根据说明书推荐的方式来正确的保存抗体!但是,腹水形式的产品请在收到后立即冻起来!因为该类产品含有大量的蛋白酶,长期在4度保存会导致抗体的降解!.大部分抗体的运输条件一般的运输过程需要1・2周的时间,所以是在4度的条件下来完成的4度运输最主要的目的是为了避免反复冻融对抗体活性的损害(如果使用干冰运输,那么收到时抗体是冻起来的,为了分装就需要解冻这就多了一次冻融的过程)所以运输过程中绝对避免干冰运输!特殊抗体的保存条件.酶联抗体永远保存在4度,避免冻起来否则会导致酶活性的下降或者丧失.偶联抗体所有偶联抗体都是在棕色管中或使用锡箔纸避光保存尤其是荧光抗体,对光极为敏感,因此在所有的实验阶段也是要避光操作的!.IgG3的同型对照永远保存在4度,避免冻起来因为如果出现冻融过程,该抗体非常容易形成多聚体无论是保存还是运输,绝对避免反复冻融!反复冻融会导致抗体变性,导致多聚体形成,从而降低抗体的结合能力!抗体保存其它相关信息关于加入甘油保存有些人会加50%的甘油到抗体中来避免反复冻融,甘油在-20度会降低冰点这对很多抗体可能是可行的但是abeam仅对非常小的一部分抗体检测过其在这种条件下的稳定性;而abeam只对按照推荐条件保存的抗体提供质量保证!加入甘油的溶液不建议在-80度保存,因为这已经超过了甘油的冰点如果您要加入甘油来保存抗体的话,请谨慎注意无菌操作,避免污染!关于蛋白保护剂蛋白在高浓度时更不容易降解1mg/ml或者更高,这就是为什么在抗体中加入BSA之类作为稳定剂的原因了;另一方面,加入的蛋白也可以减少抗体由于管壁吸附所造成的损失但是如果抗体要用来标记的话,则不能加入蛋白稳定剂,因为这些稳定剂会和抗体一起竞争结合标记物关于叠氟化钠sodiumazide的使用:为了防止微生物污染,叠氮化钠经常被加入到抗体中终浓度
0.02%w/vAbeam的很多抗体已经含有了
0.02%-
0.05%的叠氮化钠,在说明书的“Storagebuffer中有标明的在下述情况中不能使用叠氮化钠1如果抗体用于染色或处理活细胞,用于体内研究叠氮化钠在抵抗微生物的同时,对其它大部分有机物也是有毒的,因为它阻断了线粒体的cytochromeelectrontransportsystem.2要偶联带有氨基基团的抗体叠氮化钠会干扰任何含有氨基基团的偶联,因此在进行偶联之前应将叠氮化钠去除偶联后的抗体可以加入叠氮化钠保存,但是浓度只能是
0.01%o对于需要偶联的抗体,thimerosalmerthiolate可以替代叠氮化钠作为保护剂!注叠氮化钠的去除方式可以通过凝胶电泳或过滤的方式去除HgG的分子量是150kDaIgM是~600kDa;叠氮化钠的分子量只有65Da使用cutoff14kDa的滤膜即可将叠氮化钠从抗体中去除。