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饲料中黄曲霉,玉米赤霉烯酮和T-2毒素的测定LC-MS/.使用对象本方法参考NY/T207L20H试样中的黄曲霉毒素,玉米赤霉烯酮和T-2毒素经乙月青溶液提取,正己烷脱脂及多功能净化柱净化后,氮气吹干,甲酸乙睛溶液溶解,液质法测定本方法黄曲霉毒素与T-2毒素的检测限为l.Oug/kg定量限为
2.0ug/kg;玉米赤霉烯酮的检测限为
5.0ug/kg定量限为lO.Oug/kgoGB13078-2017饲料卫生标准中规定:.实验准备溶液配制甲酸溶液(
0.1%)准确量取甲酸1mL加水至1000mL摇匀即得乙酸溶液(
0.02%)准确量取冰乙酸
0.2ml加水至1000mL摇匀即得甲酸乙睛溶液取甲酸溶液50mL加乙月青至100mL摇匀即得混合标准储备液分别吸取一定量的6种真菌毒素标准品于棕色容量瓶中,用甲醇配成浓度为lug/ml的混合储备液,保存于4c冰箱中基质标准工作液分别吸取一定量的真菌毒素标准储备液,添加空白样品提取液,氮气吹干后,用流动相稀释成浓度为
1.0ug/L
5.0ug/Ll
0.0ug/L50ug/Ll00ug/L200ug/L的混合标准系列工作液,临用新配
3.样品的前处理1称取5g±
0.02g饲料样品于50ml离心管中,准确加入25ml提取液乙月青水=8416涡旋混匀2min置于超声波清洗器中超声提取20min中间振荡2-3次2取出,于8000r/min离心5min倾出上清液至分液漏斗中,加入15ml正己烷,充分振荡待静止分层后,准确量取下层液5ml待用3将上述5ml液体,过多功能净化柱,控制流速为2ml/min收集流出液,在60℃氮气下吹干4用
1.0ml甲酸乙月青溶液溶解残渣,涡旋30s经
0.22um滤膜过滤后,上机检测4液相色谱.串联质谱法液相色谱条件色谱柱C18柱
3.0x150mm
3.0um;或其他等效色谱柱柱温33℃进样量203流动相,流速见下表a.ESI+源梯度洗脱条件a.ESI•源梯度洗脱条件质谱条件a离子源电喷雾离子源b扫描方式正离子扫描模式和负离子扫描模式c检测方式多反应监测d脱溶剂气,锥孔气均为高纯氮气,碰撞气为高纯氤气,使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求e毛细管电压,锥孔电压,碰撞能量等电压值应优化至最佳灵敏度f定性离子对,定量离子对,保留时间及对应的锥孔电压和碰撞能量参考值见下表a.ESI+监测模式b.ESI•监测模式.定性测定在相同实验条件下,样品中待测物质保留时间与标准溶液保留时间的偏差不超过标准溶液保留时间的土
2.5%且样品中各祖坟定性离子的相对丰度与浓度接近的标准溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较,偏差不超过下表的范围,可判定样品中存在对应的待测物定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差(%).定量测定在仪器最佳工作条件下,混合标准工作液与试样交替进样,采用基质匹配标准溶液校正,外标法定量黄曲霉毒素B1ug/kg饲料原料种类限量ug/kg方法玉米加工产品,花生饼(粕)转50NY/T2071植物油脂(玉米油,花生油除外)W10玉米油,花生油W20其他植物性饲料原料W30饲料产品仔猪,雏禽浓缩饲料三10肉用仔鸭后期,生长鸭,产蛋鸭浓缩饲料三15其他浓缩饲料W20犊牛,羔羊精料补充料三20泌乳期精料补充料W10其他精料补充料W30仔猪,雏禽配合饲料至10肉用仔鸭后期,生长鸭,产蛋鸭配合饲料至15其他配合饲料三20玉米赤霉烯酮mg/kg饲料原料种类限量mg/kg方法玉米及其加工产品(玉米皮,喷浆玉米皮,玉米浆干粉除外)W
0.5NY/T2071玉米皮,喷浆玉米皮,玉米浆干粉,玉米酒糟类产品W
1.5其他植物性饲料原料W1饲料产品犊牛,羔羊,泌乳期精料补充料
30.5仔猪配合饲料W
0.15青年母猪配合饲料三
0.1其他猪配合饲料W
0.25其他配合饲料W
0.5T-2毒素mg/kg种类限量mg/kg方法植物性饲料原料三
0.5NY/T2071猪,禽配合饲料W
0.5时间,min流速,mL/min甲酸溶液,%甲醇/乙晴11曲线curve
00.
3703014.
00.
35545614.
00.
30100615.
00.
30100615.
10.370306时间,min流速,mL/min乙酸溶液,%甲醇/乙月青11曲线curve
00.
3703018.
00.
31090613.
00.
31090613.
10.
37030620.
00.370306真菌毒素名称保留时间min定性离子对m/z定量离子对m/z锥孔电压V碰撞能量eV黄曲霉毒素B
113.
7313.
1241.
1313.
1241.
13932313.
1285.120黄曲霉毒素B
213.
2315.
1259.
1315.
1287.
0315.
1259.1442824黄曲霉毒素G
112.
6329.
0243.
1329.
0283.
1329.
0243.1402624黄曲霉毒素G
212.
0331.
0245.
1331.
0217.
1331.
0245.1423220T-2毒素
16.
0489.
1245.
2489.
1387.
14489.
1245.2382521真菌毒素名称保留时间min定性离子对m/z定量离子对m/z锥孔电压V碰撞能量eV玉米赤霉烯酮
13.
4317.
0175.
1317.
0273.
1317.
0175.1402626相对离子丰度5020-5010-20W10允许的最大偏差±20±25+30±50。