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重庆医科大学药学院教案用纸首页教案完成时间第次课授课时间教室斗斗年级专业、层次教师职称授课方式大班大班学时3课题章、节双波长分光光度法同时测定药物中维生素C和维生素E基本教材或主要参考书医用化学实验实验目的
1、掌握紫外一可见分光光度计的使用方法
2、学习在紫外光谱区同时测定双组分体系一一维生素C和维生素E的方法教学重点、难点
1、紫外一可见分光光度计的使用方法
2、利用双波长法同时测定双组分体系一一维生素C和维生素E的方法讲授提纲及学时分配8分钟实验原理8分钟实验步骤5分钟操作要点和注意事项2分钟思考题3分钟实验报告要求教具及教学设备要求UNICO-2000紫外一可见分光光度计及相应的配套软件,石英比色皿1cm容量瓶25ml容量瓶10ml吸量管10ml移液管1ml维生素C储备液
3.X•匚,维生素E储备液
4.52Xl°Tmol•厂基本内容辅助手段和时间分配
一、实验原理维生素C(抗坏血酸)维生素E(a-生育酚)起抗氧剂作用,即它们在一定时间内能防止油脂变酸因为它们在抗氧剂性能方面是“协同的”,所以两者结合在一起比单独使用的效果更佳因此,它们作为一种有用的组合试剂用于各种食品中维生素C和维生素E在紫外光区具有不同的最大吸收波长,维生素C是水溶性的,维生素E是脂溶性的,但它们都能溶于无水乙醇,可在同一溶液中利用双组分测定原理同时测定朗伯-比耳定律应用于双组分体系,可得到下列联立方程式At=+X/a1=——十破产4总7A总上下两个方程式分别为波长九
1、波长入2下总吸光度A%、八%与维生CEC素C浓度(°)及维生E浓度(°)的关系式解上述方程即可求出cE和C本实验的关键是准确测绘出维生素C和维生素E的吸收光谱,确定最大吸收波长2d和九2
二、实验步骤
(一)配置标准溶液
1、分别准确取维生素C储备液
4.液ml、
6.00ml
8.00ml、
10.00ml于4个25ml容量瓶中,用无水乙醇稀释至刻度,摇匀
2、分别准确取维生素E储备液
4.00ml、
6.00ml、
8.00ml、
10.00ml于4个25ml容量瓶中,用无水乙醇稀释至刻度,摇匀
(二)扫描吸收光谱以无水乙醇为参比,取
6.00ml的标准溶液,在200〜300nm范围扫描出维生素C和维生素E的吸收光谱,并确定入1和入2打印谱图2分钟2分钟4分钟1分钟2分钟基本内容辅助手段和时间分配
(三)建立工作曲线以无水乙醇为参比,在波长人和入2处分别测定步骤1配制的8个标准溶液的吸光度运用UNICO-2000数据处理软件系统,分别建立并打印4条工作曲线
(四)药物中维生素C和维生素E的测定准确称取
0.0150~
0.0200g的含有维生素C(抗坏血酸)和维生素E(a—生育酚)的药物,溶于无水乙醇中,并用无水乙醇定溶于25ml容量瓶中用1ml移液管吸取上述溶液于10ml容量瓶,用无水乙醇稀释至刻度,摇匀在波长入1和入2处分别测定其吸光度
(五)数据处理.打印维生素C和维生素E的吸收光谱图,确定九1和九
2.分别打印维生素C和维生素E在九1和九2时的4条工作曲线,求出4条曲线的斜率,、k%、kx
2.计算药物未知液中的维生素C和维生素E的浓度
三、操作要点和注意事项
1、正确使用参比溶液校正仪器
2、每变换一次波长就需用参比溶液校正仪器
3、维生素C(抗坏血酸)会慢慢地氧化成脱氧抗坏血酸,所以必须每次实验时配制新鲜溶液
4、使用紫外分光光度计前必须认真阅读仪器操作规程,以免使用不当造成仪器性能下降,甚至损坏仪器
四、思考题.从维生素C和维生素E的结构式解释一个是“水溶性”,一个是“脂溶性”的原因.使用本方法测定维生素C和维生素E是否灵敏?解释其原因
五、实验报告要求.格式正确,内容完整.数据记录清晰,数据处理正确.实验报告不得抄袭和伪造2分钟2分钟1分钟2分钟3分钟。