猪前列腺素F2αPGF2α酶联免疫分析试剂盒使用说明书

猪前列腺素F2aPGF2a酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用检测范围96T

3.0ng/L-120ng/L使用目的本试剂盒用于测定猪血清、血浆、卵泡液及相关液体样本中前列腺素F2aPGF2a含量实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中猪前列腺素F2aPGF2a水平用纯化的猪前列腺素F2aPGF2a抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入前列腺素F2aPGF2a再与HRP标记的前列腺素F2aPGF2a抗体结合，形成抗体•抗原•酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色TMB在HRP前的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色颜色的深浅和样品中的前列腺素F2aPGF2a呈正相关用酶标仪在450nm波长卜测定吸光度OD值，通过标准曲线计算样品中猪前列腺素F2aPGF2a浓度试剂盒组成标本要求.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验若不能马上进行试验，可将标本放于-20C保存，但应避免反复冻融.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物醵的HRP活性操作步骤.标准品的稀释本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释.加样分别设空白孔空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同、标准孔、待测样品孔在前标包被板上标准品准确加样50n待测样品孔中先加样品稀释液40川然后再加待测样品10Rl样品最终稀释度为5倍加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀.温育用封板膜封板后置37c温育30分钟.配液将30倍浓缩洗涤液用蒸佣水30倍稀释后备用.洗涤小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干.加酶每孔加入酶标试剂50卜必空白孔除外.温育操作同

3.洗涤操作同

5.显色每孔先加入显色剂A501il再加入显色剂B50W，轻轻震荡混匀，37C避光显色10分钟..终止每孔加终止液50用，终止反应（此时蓝色立转黄色）.测定以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）测定应在加终止液后15分钟以内进行操作程序总结准备试剂，样品和标准品加入准备好的样品和标准品，37℃反应30分钟:，屈洗板5次，加入酶标试剂，37℃反应30分钟:R洗板5次，加入显色液A、B37c显色10分钟加入终止液15分钟之内读0D值计算计算以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数即为样品的实际浓度注意事项.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15・30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存.浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果.各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样.请每次测定的同时做标准曲线，最好做更孔如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（XnX5）.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染.底物请避光保存.严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以醐标仪读数为准..所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理.本试剂不同批号组分不得混用保存条件及有效期.试剂盒保存；2-8℃o.有效期6个月130倍浓缩洗涤液20mlXI瓶7终止液6mlXI瓶2酶标试剂6mlX1瓶8标准品240ng/L

0.5mlXI瓶3酶标包被板12孔X8条9标准品稀释液

1.5mlXI瓶4样品稀释液6mlXI瓶10说明书1份5显色剂A液6mlX1瓶11封板膜2张6显色剂B液6mlX1/瓶12密封袋1个120ng/L5号标准品150pl的原倍标准品加入150川标准品稀释液60ng/L4号标准品150m的5号标准品加入150m标准品稀释液30ng/L3号标准品150m的4号标准品加入150m标准品稀释液15ng/L2号标准品150m的3号标准品加入150出标准品稀释液

7.5ng/L1号标准品150口1的2号标准品加入150jU标准品稀释液。