文本内容:
材料与方法书写格式举例1材料与方法实验动物及标本处理实验动物及分组26只SPF级10月龄SpragueDawleySD雌性大鼠,体质量425±50g;45只SPF级3月龄SD雌性大鼠,体质量300±25g均由上海中医药大学实验动物中心购买并饲养,合格证号[SCXK沪2008-0016]所有大鼠同一室内按组分笼饲养,室温18〜22C12h光照,12h黑暗的条件下,自由进食、饮水,饲喂大鼠标准饲料,大鼠全价颗粒饲料由实验动物中心提供其中18只10月龄大鼠饲养至16月龄作为自然衰老绝经状态模型、18只3月龄大鼠行去势手术后作为去势绝经状态模型、27只3月龄大鼠适应性喂养1周作为青年模型、8只10月龄大鼠饲养至22月龄作为老年模型开始本实验,8周后处死在两组模型组中,10只大鼠下丘脑检测性激素促卵泡成熟激素folliclestimulatinghormoneFSH>促黄体生成素luteinizinghormoneLH>雌二醇estradiolE2及超氧化物歧化酶superoxidedismutaseSOD、丙二醛malondialdehydeMDA、总抗氧化能力totalanti-oxidativecapacityT-AOC;5只大鼠下丘脑检测线粒体DNAmitochondriaDNAmt-DNA损伤基因Col、Coin表达;3只大鼠电镜下检测下丘脑线粒体微观结构由于18月龄大鼠饲养周期较长,与去势5月龄大鼠实验时间前后相错,因此血清、下丘脑性激素水平和氧化损伤指标分开检测和统计,两次均设青年模型组,一次10只,另一次9只去势手术方法大鼠经3%戊巴比妥钠L4mL・kg”腹腔注射ip麻醉后,背位固定,剪除腹部长毛,充分消毒术野,沿正中线开腹,暴露Y型子宫,在子宫远端找到包埋在脂肪团中的卵巢,分离、套线结扎近端后剪除卵巢,止血后将子宫角送回腹腔,同法摘除另一侧卵巢,缝合腹部切口血清制备大鼠经3%戊巴比妥钠L4mL・kg」ip麻醉后,背位固定,沿正中线开腹,充分暴露腹主动脉,抽取血液5〜6mL放置2h后,血样经4000rpm4c离心10min取血清,-60℃冰箱保存下丘脑取材取下大鼠头颅,快速沿背侧正中线开颅,充分暴露大脑并仔细翻开,断开视交叉,以神经分离棒分离并取出下丘脑,称重,置于Eppendorf离心管中于-60℃保存主要试剂及来源FSH、LH、E2放免药盒、,北京北方生物技术研究所;SOD、MDA、T-AOC、考马斯亮兰蛋白测试盒、,南京建成生物工程研究所第一分所;反转录试剂盒PrimeScript®RTreagentKitPerfectRealTimeTaKaRaCode:DRR037ARealTimePCR试剂盒[SYBR®PremixExTaqTMIIPerfeetRealTimeTaKaRaCode:DRR081A]均购自上海硕盟生物科技有限公司;细胞色素氧化酶亚单位ICoI和HIColli[7-8]及内参照3-磷酸甘油醛脱氢酶GADPH基因序列由上海博彩生物科技有限公司合成引物序列如下CoI:F:5GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG-39R:59-TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA-39;Colli:F:59-CGTAGTAGGCAAACAATAAGG-3\R:5LTTCTATTCACCNTCTCGGAAAG3;GADPHF:5^GGTCGGAGTCAACGGATTTG-39R:5-ATGAGCCCCAGCCTTCTCCAT-
31.3观察指标和测定方法检测血清和下丘脑性激素水平FSH、LH、E2按试剂盒要求操作检测下丘脑SOD、MDA、T-AOC活性黄喋吟氧化酶法检测组织SOD硫代巴比妥酸(TBA)比色分析法检测组织MDA分光光度比色法检测组织T-AOC按试剂盒要求操作利用RT-PCR方法检测下丘脑线粒体DNA损伤基因指标Col、Colli提取下丘脑组织块中RNA按照反转录试剂盒的实验操作将RNA反转录成cDNA然后按照RealTimePCR试剂盒的实验操作,以GADPH作为内参用FTC-2000型荧光定量基因扩增仪进行cDNA的扩增,并进行数据处理电镜检测下丘脑组织线粒体形态变化下丘脑取材后直接置于
2.5%戊二醛溶液固定2h1%钺酸后固定2h酒精和90%丙酮阶梯脱水,100%丙酮浸透、包埋、超薄切片,醋酸双氧铀-柠檬酸铅双染色后透射电子显微镜下镜检统计学方法所有数据应用SPSS
15.0软件包进行统计分析两组间比较用t检验;数据符合方差齐性要求,多组间差异采用单因素方差分析(ANOVA分析)及LSD法进行多重比较;若数据不符合方差齐性要求,多组间差异则采用Kruskal-Wallis非参数检验及LSD法进行多重比较以P
0.05P
0.01为差异有统计学意义神经药理学报2011102:28-
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